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La polimerasi RNA alphavirus, nsP4, ha sempre un residuo Tyr all'estremità N-terminale. In precedenza abbiamo riportato che il residuo Nike Roshe Running Uomo Chiaro Grigio Blu Scarpe N-terminale Tyr di nsP4 di Sindbis virus, le specie del genere tipo Alphavirus, può essere sostituito con Phe, Trp, o il suo senza alterare il fenotipo wild-type in cellule in coltura, ma che altre sostituzioni testati, ad eccezione di Met, erano letali o quasilethal. Qui riportiamo l'identificazione delle due mutazioni soppressori di nsP4 (Glu-191 al Leu e Glu-315 a Gly, Val, o Lys) e una in NSP1 (Thr-349 di Lys) che permettono nsP4 con amminoacidi aromatici dell'N -terminus per funzionare a 30 ° C. La mutazione soppressore a nsP4 Glu-315 si è verificato più frequentemente. Tutte le tre mutazioni soppressore soppressi gli effetti di Ala, Arg o Leu al N-terminale della nsP4 quasi uguale efficienza e quindi l'effetto della mutazione soppressione è indipendente del residuo nsP4 N-terminale. Mutanti Nike Free Run Rosa ricostruiti contenenti NSP1-T349K o nsP4-E315G combinato con Ala-nsP4 avevano un difetto in meno filamento sintesi di RNA a 40 ° C. Un doppio mutante contenente nsP4-Q191L combinato con Ala-nsP4 era instabile e non poteva essere testato per la sintesi di RNA, perché tornò a temperatura indipendenza troppo rapidamente. Combinazioni di NSP1-T349K o nsP4-E315G con Leu, Arg, His, o qualsiasi amminoacido aromatico al N-terminale della nsP4 anche fatto il virus mutante temperatura sensibile. I risultati di questo studio e da una precedente relazione sulla chiusura di meno filamento sintesi di RNA a 40 ° C con la mutazione NSP1-A348T in TS11 suggerisce che l'N-terminale nsP4 interagisce con NSP1 durante l'inizio della meno filamento sintesi di RNA.
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